Extraction de précision de la podocine

Introduction de base à Podocin
Biofilm contient des protéines appelées podocin, est le principal porteur de la fonction de biofilm. Selon la difficulté de la séparation des protéines et l’emplacement de la distribution dans la membrane, la podocine peut être divisée en trois catégories: la podocine externe, la podocine périphérique, la podocine ou la podocine intégrée et la protéine d’ancrage lipidique.
La podocine est un composant important de la membrane plasmique. Il joue un rôle biologique très important en acceptant la protéine réceptrice de la molécule de signal externe, la protéine porteuse et la protéine canal portant le transport de la substance, la protéine enzymatique catalysant diverses réactions et ainsi de suite.
Définition de Podocin
Biofilm contient des protéines appelées podocin, est le principal porteur de la fonction de biofilm.
La podocine est la principale manifestation de la fonction membranaire. On estime qu’environ 30% des protéines codées par le génome nucléaire sont la podocine. Selon la liaison de la podocine aux molécules lipidiques, elles peuvent être divisées en protéines intégrales, en protéines périphériques et en protéines à ancrage lipidique.
Classification de Podocin
Selon la difficulté de la séparation des protéines et la localisation de la distribution dans la membrane, la podocine peut être divisée en deux catégories: la protéine extrinsèque  et la podocine intrinsèque ou la protéine intégrale (  protéine intégrale). La podocine externe représente environ 20 à 30% de la podocine, qui est répartie sur la surface interne et externe de la membrane, principalement sur la surface interne. C’est une protéine hydrosoluble. Il se lie à la tête polaire de la molécule membranaire par liaison ionique et liaison hydrogène. , Soit par l’interaction avec la protéine intrinsèque, indirectement avec la liaison membranaire; La protéine intrinsèque représente environ 70% à 80% de la podocine, les molécules des milieux amphiphiles peuvent être incorporées à différents degrés de molécules de bicouche lipidique. Et certains tout au long de la bicouche lipidique, les deux extrémités de la membrane exposée à la surface interne et externe, ce type de podocine, également connu sous le nom de transpodocine. La partie interne de la podocine qui est exposée à la membrane contient des acides aminés plus polaires, qui est hydrophile et est proche de la tête hydrophile de la molécule de phospholipide. La podocine incorporée dans la bicouche lipidique se compose de quelques acides aminés non polaires, La queue hydrophobe de la molécule se lie les uns aux autres et est donc très étroitement liée à la membrane.
Les protéines à ancrage lipidique peuvent être divisées en deux classes: les protéines liées au glycophosphatidylinositol (GPI), les GPI situées dans les lobes externes de la membrane cellulaire et la phospholipase C (qui reconnaît les phospholipides contenant de l’inositol) pour libérer la protéine liée. De nombreux récepteurs de la surface cellulaire, des enzymes, des molécules d’adhésion cellulaire, et PrPc causant la tremblante sont toutes ces protéines. Une autre protéine à ancrage lipidique se lie à une longue chaîne hydrocarbonée insérée dans la valvule d’une membrane plasmique, telle que les sous-unités alpha et gamma de la protéine trimérique régulatrice de liaison au GTP.

Fonction Podocin
La fonction de la podocine est multiforme. Certains podocin peut agir comme ” Supports & quot; Pour transporter des substances dans et hors des cellules. Certains Podocin sont des hormones ou d’autres substances chimiques récepteur spécifique, comme les cellules thyroïdiennes à accepter l’hypophyse du récepteur de l’hormone stimulant la thyroïde. La surface de la membrane et une variété d’enzymes, de sorte que des réactions chimiques spécifiques peuvent être effectuées sur la membrane, tels que la membrane du réticulum endoplasmique peut catalyser la synthèse des phospholipides. La fonction de reconnaissance cellulaire est également déterminée par la protéine sur la surface de la membrane. Ces protéines sont souvent des antigènes de surface. L’antigène de surface et les anticorps spécifiques peuvent être combinés, comme la surface de la cellule humaine possède un antigène protéique HLA, est un dimère très variable. Différentes personnes ont différentes molécules HLA, la transplantation d’organes, les organes implantés sont souvent exclus, c’est parce que l’implantation de molécules HLA ne sont pas acceptés par le bénéficiaire de la raison.
Pour résumer, la fonction podocine est 1) les transporteurs; 2) les enzymes; 3) recevoir des signaux de reconnaissance; 4) structures de liens.
Mobilité de Podocin
Beaucoup de podocine dans la bicouche lipidique peuvent se déplacer librement, ce qui peut être à travers la fusion humaine et la souris de deux cellules, puis l’un des anticorps aux cellules, comme l’anticorps de souris à la coloration fluorescente de colorant, et puis ce anticorps avec fluorescence sont placés dans Les milieux externes des cellules fusionnées et l’anticorps se lient aux antigènes de surface des cellules de souris. Résultats La surface cellulaire des souris a également eu une fluorescence, alors que les cellules humaines ne fluorescent pas en raison de l’inadéquation de la liaison d’anticorps de souris. Afin que vous puissiez distinguer les deux sortes d’antigène de surface de cellule sous le microscope fluorescent. Les résultats ont montré que les antigènes de surface des cellules humaines et murines étaient distinctement différents l’un de l’autre lorsque les cellules ont commencé à fusionner. Mais après fusion, les deux antigènes se répartissent progressivement uniformément sur la surface des cellules de fusion. Cette expérience démontre que la podocine est mobile et démontre également la fluidité de la membrane.
Mais pas tous podocin peut se déplacer dans la membrane, certains Podocin ne peut pas être déplacé ou ne peut pas se déplacer librement.
Extraction de podocine
Extraction de podocine d’échantillons frais (méthode simplifiée)
(PH 8,5-9,0): Tris-HCl 50 mM, EDTA 2 mM, NaCl 100 mM, Triton X-100 à 0,5%, pH ajusté à 8,5-9,0. Utiliser 100 μg / ml avant lyse Lysozyme, 1 μ l / ml d’inhibiteur de la protéase PMSF. La quantité du lysat était de 10 à 50 ml de tampon de lyse / 1 g de cellules humides.
2, 40 ml de bactéries dans 12000 g, 4 ° C centrifuger 15 minutes pour recueillir les bactéries, le précipité en suspension dans du PBS lavé 2 fois, 1 ml de suspension de lyse en ajoutant une suspension cellulaire.
3, écrasement à ultrasons, en utilisant 300w, 10s ultrasons / 10s intervalle, ultrasons 20min, répétées gel-dégel ultrasons 3 fois pour effacer ou décoloration des bactéries.
4,1000g centrifugé pour éliminer les débris de grande taille, le surnageant peut être directement dénaturé électrophorèse PAGE, ou 1% SDS solution après la dialyse congelés.